明膠酶譜法分析試劑盒總結(jié)有以下幾點(diǎn)：

信帆生物的明膠酶譜試劑盒，主要用于檢測MMP2，MMP9的活性，適用樣本多樣，包括細(xì)胞培養(yǎng)液，細(xì)胞上清液，全血等樣本，操作和WB免疫印跡差不多，產(chǎn)品現(xiàn)貨供應(yīng)！

本試劑盒采用酶譜法(Zymography)檢測MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一種廣為使用的、基于SDS-PAGE 電泳和反相凝膠染色的蛋白酶檢測方法，其靈敏度可達(dá)1 nM，高于ELISA方法，其基本原理和程序是：制備加有膠原酶底物的SDS-PAGE 凝膠，含蛋白酶的樣品在此凝膠中進(jìn)行電泳，電泳結(jié)束后取出凝膠與酶反應(yīng)Buffer 孵育，凝膠染色與脫色。凝膠中由于含底物蛋白而被深染，形成深色背景，但在有蛋白酶條帶的位置，蛋白酶將降解凝膠中的底物蛋白，因而不被染色而形成透亮區(qū)域，從而能同時指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶譜)及活性。本試劑盒提供MMP-2、MMP-9 特異蛋白底物及酶學(xué)反應(yīng)緩沖液，可檢測少至0.1~0.5 μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶譜及活性，檢測靈敏度~1nM。試劑盒可進(jìn)行50次標(biāo)準(zhǔn)小膠檢測，如果小膠加樣孔為10~15個，則總計(jì)可檢測500~750個樣品。

MMP檢測注意事項(xiàng)：

細(xì)胞培養(yǎng)基要用無血清培養(yǎng)基；

樣本裂解時不含EDTA；

明膠酶譜的活性受鈣離子，鋅離子，和PH值等因素的影響，因此緩沖液 配制應(yīng)嚴(yán)格準(zhǔn)確，盡量用超純水，孵育溫度也掌握好。

因?yàn)闄z測蛋白活性,所以應(yīng)盡量避免蛋白變性,我們一般都要求冰上操作,電泳也放在冰水里進(jìn)行的。

substrateG是10×使用說明：

看老師配多少膠，比如老師用10ml的膠 ，就往里邊加1ml的substrateG就可以了。將凝膠放在掃描儀上掃描。雖然MMP條帶透明，但凝膠背景并非真正全黑。解決辦法：可用非透射光掃描，或用軟件圖像處理程序調(diào)整背景顯示為灰度顯示，并盡量設(shè)置為黑色。MMP條帶則為白色 。