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潮霉素B(Hygromycin B)是由吸水鏈霉菌(Streptomyces hygroscopicus)代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素,通過(guò)干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀而抑制蛋白合成,從而殺死原核(如細(xì)菌)、真核(如酵母菌,真菌)和高等哺乳動(dòng)物真核細(xì)胞。
大腸桿菌( Escherichia coli.)來(lái)源的潮霉素抗性基因(hyg或hph),編碼潮霉素B磷酸轉(zhuǎn)移酶,將潮霉素B轉(zhuǎn)化成不具有生物活性的磷酸化產(chǎn)物,從而起到解毒作用。針對(duì)這一原理,潮霉素B是一種非常有用的選擇性標(biāo)記,用來(lái)篩選和維持培養(yǎng)成功轉(zhuǎn)染潮霉素抗性基因的原核或者真核細(xì)胞。另外,由于作用模式的差異,常與G418 (Cat:G8161),Zeocin(Cat:Z8020)和Blasticidin S(Cat:B9300)聯(lián)合使用進(jìn)行雙抗性陽(yáng)性細(xì)胞株的選擇。潮霉素B還能用作抗病毒劑,因其選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,且具有抑制翻譯的功效。還可混合入動(dòng)物飼料中起到驅(qū)蟲功能。
潮霉素B的應(yīng)用
1.篩選和維持培養(yǎng)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Hph 載體的原核細(xì)胞或真核細(xì)胞(植物細(xì)胞和哺乳動(dòng)物細(xì)胞);
2.由于作用模式的差異,常與G418 (GeneticinTM),Zeocin™和blasticidin S聯(lián)合使用,篩選穩(wěn)定轉(zhuǎn)染兩個(gè)不同載體的細(xì)胞株;
3.抗病毒劑,由于潮霉素B選擇性滲透進(jìn)入病毒感染增強(qiáng)通透性的細(xì)胞,而且具有抑制翻譯的功效;
4.作為驅(qū)蟲藥加入動(dòng)物飼料;
5.雙抗性穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選的抗生素作用機(jī)制及抗性
6.抗生素抗性機(jī)制抗性基因哺乳動(dòng)物篩選濃度
i.潮霉素B干擾70S核糖體易位和誘導(dǎo)對(duì)mRNA模板的錯(cuò)讀Hph 200~500μg/mL;
ii.G418干擾80S核糖體功能和抑制蛋白合成Tn5/Tn60 1100~1000μg/mL;
iii.Zeocin摻入或者切割DNA引起細(xì)胞死亡Sh ble 50~100μg/mL;
iv.blasticidin S核糖體上抑制肽鍵形成Bsd/BSD 3~50μg/mL。
7.羅氏潮霉素B應(yīng)用濃度
潮霉素B用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化。使用濃度為50-1000 μg/mL,優(yōu)濃度需要?dú)缜€來(lái)確定。
i.哺乳動(dòng)物細(xì)胞·200-500 μg/mL;
ii.細(xì)菌/植物細(xì)胞·100-300 μg/mL;
iii.真菌·300-1000μg/mL。
注意事項(xiàng)
1) 潮霉素B的抗性基因(hyg或hph)除了來(lái)自E. Coli.之外,還發(fā)現(xiàn)于其他的菌株,包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2) 本品為有毒化合物,避免與皮膚和眼睛接觸,請(qǐng)小心操作。
3) 為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
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