維生素 B6 檢測(cè)試劑盒操作簡(jiǎn)單，效果好

維生素 B6（Vitamin B6）又稱吡哆素，其包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺，在體內(nèi)以磷酸酯的形式存在，是一種水溶性維生素，肉類、全谷類、蔬菜和堅(jiān)果類中含量較高。在機(jī)體中參與多種蛋白質(zhì)和氨基酸的代謝，對(duì)生物體具有極其重要的作用。
 

VB6 與 4-氨基安替比林在強(qiáng)氧化劑作用下生成穩(wěn)定的黃色化合物，在 400nm 有特征吸收峰?？梢?jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、微量玻璃比色皿/96 孔板、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器EP 管、冰和蒸餾水。
 

一、粗酶液提取：
組織：將樣品磨碎，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加
入 0.6mL 提取液）加入提取液，60℃浸提 30min，加蒸餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心
10min，取上清測(cè)定（動(dòng)物組織及其他蛋白含量較高的樣本建議離心 20-30 分鐘或反復(fù)離心 2-3 次至
上清無(wú)混濁）。
 

細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加
入 0.6mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；加蒸
餾水 0.4mL，混勻后于 25℃，16000rpm 離心 10min，取上清測(cè)定。
 

液體：直接檢測(cè)。
 

二、測(cè)定步驟：
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 400nm，蒸餾水調(diào)零。
2、將 10mg/mL（10000μg/mL）標(biāo)準(zhǔn)液用試劑一稀釋為 500、250、125、62.5、31.2515.625 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。

三、維生素 B6 含量計(jì)算：
1、 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：
以各個(gè)標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度為 x 軸，其對(duì)應(yīng)的△A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)方程 y=kx+b，將△A 帶入方程得到 x（μg/mL）
2、 維生素 B6 含量的計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算
VB6（μg prot）= x×V 提取÷（V 提取×Crp）= x÷Cpr
（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算
VB6（μg/g 鮮重）= x×V 提取÷W=x÷W
（3）按照細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
VB6（μg/104 cell）= x×V 提取÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）=x÷細(xì)胞數(shù)量（萬(wàn)個(gè)）
（4）按液體體積計(jì)算
VB6（μg/mL）= x×V 提取÷V 提取= x
V 提取：提取液體積，1mL； V 樣：加入的樣品體積，0.04mL；Cpr：樣本蛋白濃度，mg/mL；
W：樣本質(zhì)量，g。
1、 A 大于 1.2 時(shí)，建議將樣品用試劑一稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
2、 蛋白濃度較高的樣品，比如動(dòng)物組織、豆類種子等，若顯色完成后有沉淀產(chǎn)生，將樣本稀釋后再測(cè)定，在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。
3、 顯色完成后立即進(jìn)行測(cè)定，盡量保證反應(yīng)時(shí)間一致。

注意：

1. 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、診斷或治療，食品及化妝品等用途。請(qǐng)勿存放于普通住宅區(qū)。

2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿好實(shí)驗(yàn)服并佩戴一次性手套和kou罩操作。